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par t labo Sam 06 Mar 2010, 12:15Numération des réticulocytes
PRINCIPE
Les réticulocytes sont le dernier stade de maturation de la lignée érythropoïétique avant le globule rouge mature. Ils se différencient de ces derniers par la présence d'acide ribonucléique (ARN) ribosomal.
La mettre en évidence l'ARN se fait par sa précipitation en une substance granulofilamenteuse (plus ou moins dense selon le degré de maturation du réticulocyte) après incubation de sang total avec un colorant vital : bleu de crésyl brillant.
Réactif
*Bleu de crésyl brillant……………………………………..1g
*citrate trisodique………………………………………….0.4g
*solution de chlorure de sodium à 9 ‰………………….100ml
Technique :
*Mélanger trois gouttes de solution de bleu avec trois gouttes de sang dans un tube à hémolyse.
*Incuber pendant 20 à 30 minutes à 37 °C (étuve ou bain-marie).
*Après remise en suspension du mélange, faire un frottis, sécher et examiner à l'objectif 100 à l’immersion.
=>La substance granulofilamenteuse apparaît colorée en bleu-violet et les hématies en bleu ou vert pâle.
Lecture
*Compter les hématies dans 10 champs successifs et faire la moyenne par champs (soit M).
*Compter les réticulocytes dans 100 champs successifs et faire la moyenne par champs (soit N).
=> Le pourcentage de réticulocytes = (N/M)*100
Il convient d'exprimer les résultats en valeur absolue en multipliant le pourcentage des réticulocytes par le nombre total d'hématies.
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