Coloration de Ziehl-Neelsen

La coloration de Ziehl-Neelsen est une méthode de coloration permettant l'identification des mycobactéries au microscope. Elle fait partie des colorations qui mettent en évidence l'acido-alcoolo-résistance, caractère fondamental des mycobactéries, en prenant en compte la difficulté de pénétration des colorants.

Ce type de coloration comporte trois temps :

l'application d'un colorant énergique à chaud ou à froid ;
les décolorations successives par un acide fort puis à l'alcool à 90°;
une recoloration de contraste.


Méthode de coloration:

Coloration de Ziehl-Neelsen
La technique décrite ici est la technique classique de référence. Cependant, elle est de moins en moins utilisée en raison des risques qu'elle fait prendre au manipulateur. En effet, les colorants tels que la fuchsine sont hautement toxiques et cancérigènes, tout particulièrement lorsqu'ils sont utilisés à chaud (à cause des vapeurs).


- 1er temps : coloration par la fuchsine à chaud
On recouvre le frottis d'un papier filtre imprégné de fuchsine de Ziehl.
Chauffage à émission de vapeur pendant dix minutes au moins, en veillant à ne pas laisser sécher le papier. Rinçage à l'eau distillée stérile.
- 2e temps : décoloration
Trempage de la lame deux minutes dans une solution d'acide, suivi d'un rinçage.
Trempage la lame cinq minutes dans l'alcool à 90°, suivi d'un rinçage.
- 3e temps : recoloration
On recouvre la lame pendant deux minutes d'une solution de bleu de méthylène, puis on rince.


Coloration de Kinyoun
A la différence de Ziehl-Neelsen (chauffage jusqu'à production de vapeur), dans cette coloration on ne chauffe pas, on utilise un colorant comprenant une concentration élevée de fuchsine basique (3,1%) et de phénol (6,25%), ce qui permettait de colorer seulement pendant 5 min sans chauffer. L’avantage de cette coloration à froid réside dans sa rapidité d'exécution. Avec cette technique les bacilles sont pâles et la coloration manque de contraste: elle n'est pas à conseiller en routine, il est préférable d'utiliser la coloration de Ziehl-Neelsen à chaud.


- Filtrer la Fuchsine avant de la déposer sur la lame et laisser agir à température ambiante pendant 5 minutes puis rincer à l'eau.
- Recouvrir la lame du mélange acide - alcool pendant 3 minutes puis rincer à l'eau.
- Recouvrir la lame avec le bleu de méthylène pendant 2 minutes puis rincer à l'eau.
- Avant la lecture laisser sécher les lames à l'air ou dans une étuve.


Résultat:

L'observation s'effectue au microscope optique, avec objectif à immersion. Les mycobactéries apparaissent alors comme des bacilles rouges sur fond bleu-gris.

meci c'est tres interessant

j'ai une question svp: si ces bacteries n'avaient pas cette propriété d'acido alcoolo resistance, quel sera les resultats dans ce cas et pourquoi

merci de prendre la peine de me repondre

mais j'aimerais comprendre cette sensibilité acide-alcool , est ce que l'acide et l'alcool affecte la paroi des bacteries sensibles (BAAR) , peut etre que ça detruit leur paroi c'est pour cela peut etre qu'elle se colore en bleu quand on lui rajoute du bleu de methylene ( je ne sais pas )

nn, les BAAR sont les bactéries acido-alcoolo-résistants ne sont pas les sensibles, et en plus la décoloration ne touche pas la parois, l'acide-alcool pénétre à l'intérieur des bactéries sensibles, par contre la parois des BAAR n'est pas impérmiable à ce mélange.
la fuschine en 1er temps pénétre au cytoplasme de toutes les bactéries BAAR et autres, aprés décoloration seules les bactéries nn AAR se décolorent, alors que les BAAR restent rouge, aprés recoloration le bleu pénétre au cytoplasm des bactéries nn AAR

merci de me repondre

je me suis trompé en ecrivant ma question je voulais parler des bacteries sensibles et non pas des BAAR

ok ce n'est pas grave
j'espère que c'est bien compris maintenant

oui c'est tres bien compris, merci t labo

merci bc

salut,Nocardia présente le caractère AAR mais le temps de contacte de l'acide et l'alcool est moins par apport au mycobactérie